细胞球培养常见 Q&A（1）

本页整理细胞球培养中最常见的产品、操作和实验设计问题。不同细胞系的最佳条件可能不同，具体参数请结合细胞状态、文献和对应产品说明书验证。

一、产品特性和产品选型问题

产品的自研超低吸附表面与多微凹坑环境帮助细胞沉降、聚集，让细胞在特有结构的辅助下自然成球。多年客户验证表明，它可以提升细胞成球能力，批量均一化培养大量细胞球。三体生物是专注细胞成球的耗材公司，数年研究只为把细胞成球这一件事情做好。

绝大多数情况下不需要。产品依靠超低吸附涂层和微凹坑结构促使细胞自然聚集成球，不以基质胶或离心为前提。少数细胞本身难以成球时，也可以采用基质胶辅助或离心来提升成球能力，但应设置对照并先验证条件。

对细胞成球不熟悉、还在测试成球条件，既不知道能否成球，也不清楚成球直径大小时，建议首选 B 款蜂窝片。其 1200 μm 微凹坑直径兼容性较高；作为放在 24 孔板里的培养片，随用随取，测试次数多，灵活方便。
已明确所在细胞系可以成球，细胞球直径在 250 μm 以内，需要批量均一化成球，且测试条件较少、主要目的是获取细胞球时，可以选用 A 款蜂窝片。
成球条件已经稳定，主要目的是批量成球，尤其是几十种不同条件下的药筛实验，且细胞球直径在 600 μm 以内时，可以选用 96 孔蜂巢板。它可同时测试 96 种处理条件，并在板内形成约 5376 个细胞球。

按细胞球极限承载直径和单个载体的微凹坑数量，可先这样理解：

具体规格和批次信息请以对应产品的最新说明书为准。

细胞球极限承载直径是产品物理微凹坑的规格，代表微凹坑最大可以承载的细胞球直径，并不代表细胞球在对应产品中一定会培养到这么大。细胞球直径主要取决于细胞系本身的成球特性、接种量、培养基类型和细胞状态等因素。一般来说，接种量越多，成球直径越大，但并非绝对。

A、B 两款蜂窝片都放置在 24 孔板内进行成球。通用 24 孔板即可，24 孔板本身不要求低吸附或具备其他特殊表面处理；它主要用于承载产品，超低吸附涂层和微凹坑结构在蜂窝片本身。详细步骤可参考 A 款蜂窝片说明书和 B 款蜂窝片说明书。

每种细胞系的接种量不同，应结合文献和预实验确定。传统 96U 板的细胞接种量，可以对应到蜂窝系列产品的一个微凹坑接种量。
以 B 款蜂窝片为例，如果文献中对应细胞系在 96U 板的接种量为 m 个细胞/孔，那么 B 款蜂窝片每个 24 孔单孔有 60 个微凹坑，对应接种量可按 60m 个细胞/孔（24 孔板单孔）起步换算。
如果计算困难，或没有文献支持，也可以按照说明书中的基准值进行梯度摸索。

按当前说明书先用培养基预润，并排除微凹坑中的气泡，之后轻柔接种。常规成球不以离心或额外防贴处理为前提；特殊细胞或特定实验方案需要单独讨论和验证。

建议先静置培养，让细胞自然沉降。是否需要其他动态培养条件，应根据细胞特性和研究目的决定，并通过对照实验确认。

通常以 2～5 天作为首次观察窗口，但并不存在适用于所有细胞的统一收球日。应根据形态、紧实度、活性、球径和实验终点决定收球时间。长期培养时，随着代谢和细胞增殖增加，应提高观察和换液频率。已有客户验证蜂窝片可培养细胞球 21 天，但不同细胞仍需按具体情况判断。

能够自发成球时，一般不需要。若要加胶，应先明确实验目的，设置无胶对照，并按照该细胞系文献测试对应的试剂和浓度。

细胞球的一般形态可以直接在普通显微镜下观察。高倍、深层扫描或特殊高内涵设备需要核对工作距离、板底厚度、折射率和光路。若原位拍照模糊或不满足要求，可按说明书将细胞球转移至共聚焦小皿后再观察。

先记录成球状态。已经聚集较紧实的细胞球可以取出，并按对应说明书用轻柔方式操作；必要时先试用一片并比较回收率。出现多球与空坑并存时，应检查液流、震动和转移动作是否过大。

可以提供细胞来源和传代信息、接种量和活率、培养基、分时点明场图、预润排泡步骤、换液步骤及对照结果给售后支持团队，由其逐项排查。

可以进行多条件药物处理，也可以设计片内或转板路线。实验前应明确处理单位、每组独立铺板次数和检测终点。同一孔中的多个球如果接受同一处理，不能直接把球数当作多个独立生物学重复，统计设计需要在实验前确认。

产品为一次性耗材，不建议重复使用或进行未经验证的二次灭菌；低吸附涂层可能因此受到影响。产品已经过辐照灭菌，可以拆开密封包装后直接使用。

记录产品批次、包装状态、打开地点和时间，以及培养箱、培养基和其他耗材的对照情况与污染出现时间，再据此判断污染来源。必要时保留污染样本和现场记录，便于售后支持进一步分析。